Isolation of phytoplasmas associated to frogskin disease in cassava / Aislamiento de fitoplasmas asociados a cuero de sapo en yuca

ABSTRACT Frogskin is the most limiting disease of cassava crops in Colombia, causing losses in production up to 90%. Since this disease was associatated with 16SrIII phytoplasma presence, a study was carried out to isolate this phytoplasma using liquid and solid culture media. Root, petiol, stem, leaf and cutting tissues of cassava affected by frogsking were employed as source materials. Molecular and microscopy techniques were applied to verify the phytoplasma growth and to discard other microorganism´s presence. The results showed that the media consistently allow phytoplasma growth, and colonies in solid medium were obtained. PCR, qPCR and sequencing tests confirmed the presence of 16SrIII group phytoplasmas in both liquid and solid culture media. Additionally, the isolation of a pigeon pea witches' broom phytoplasma strain (group 16SrIX) was obtained from stems, petioles and flowers of symptomatic Catharanthus roseus confirming the effectiveness of the medium in the phytoplasma isolation and culture. This is the first isolation of field-collected phytoplasma strains in groups 16SrIII and 16SrIX in America that confirm and corroborate the previous results in phytoplasma cultivation achieved on micropropagated and field-collected phytoplasma infected samples.

RESUMEN En Colombia, el ''cuero de sapo'' es la enfermedad más limitante del cultivo de yuca, que ocasiona pérdidas en producción de raíces hasta del 90%. La presente investigación tuvo como objetivo, el aislamiento in vitro del fitoplasma asociado a cuero de sapo. Para ello, se emplearon medios de cultivo líquido y sólido, usando tejidos de raíces, peciolos, tallos, hojas y semillas de yuca, afectada por la enfermedad. Pruebas de PCR, qPCR, secuenciación, microscopia de luz y microscopia electrónica de transmisión fueron aplicadas, para verificar el crecimiento de fitoplasmas y descartar la presencia de otros microrganismos. Los resultados muestran que los medios permiten, consistentemente, el crecimiento de fitoplasmas, obteniendo colonias en medio sólido a partir de medio líquido. Las pruebas de PCR, qPCR y secuenciación confirmaron presencia de Cassava frogskin phytoplasma del grupo 16SrIII, en los dos medios de cultivo. Además, a partir de las colonias, se lograron fotografías de células con morfología y tamaño similares a las fitoplasmáticas. Es la primera vez, en el mundo, que se consolida información suficiente del aislamiento de fitoplasmas en medio artificial. Adicionalmente, se logró el aislamiento de Pigeon pea witches´ broom phytoplasma del grupo IX, a partir de tallos, peciolos y flores de vinca (Catharanthus roseus), con síntomas asociados a fitoplasmas. Este proceso permitió corroborar la efectividad del medio y la morfología de las células fitoplasmáticas, bajo microscopia electrónica.

Allelic frequency of the Kappa-Casein gene in Colombian and creole cattle breeds / Frecuencia alélica del gen Kappa-Caseína en bovinos criollos y colombianos / Freqüência do alelo de gene de Kappa-Caseína em bovinos crioulos e colombianos

Colombia has one of the most genetically diverse creole cattle populations, with eight creole breeds and two improved creole (Colombian) breeds. A high demand for meat and milk has led to the inevitable selection of highly productive cattle and the introduction of foreign breeds. Unfortunately, these breeds are often ill-suited for tropical conditions. These factors threaten the size of the creole livestock population, which is considered part of Colombia's national heritage. Objective: to estimate the allelic frequencies of the Kappa-Casein gene (CNS3) in Colombian creole cattle breeds (GCC). Methods: a total of 354 blood samples were taken from 30 animals of each of the following breeds: Blanco Orejinegro (BON), Caqueteño (CQT), Casanareño (CAS), Horned Costeño (Costeño con Cuernos, CCC), Chino Santandereano (ChS), Hartón del Valle (HV), Romosinuano (ROM), and Sanmartinero (SM), each representing the 8 established ''criollo'' (creole) breeds; the Lucerna (LUC) and Velasquez (VEL) representing the two Colombian improved breeds; and Brahman and Holstein as control breeds. DNA was extracted by a salting-out procedure and a 453 bp fragment on chromosome 6 was amplified by PCR. CSN3 alleles were identified using single strand conformation polymorphism (SSCP) and their sequence compared with those of the Genebank for Bos taurus and Bos indicus. Results: higher frequencies for allele variants of CSN3 A (0.39) and B (0.41) were found relative to the frequencies of I (0.038), G (0.095), A1 (0.025), E (0.006), and N (0.006). The allele of interest (CSN3 B) had a high frequency in the CCC (0.81), ROMO (0.66), CQT (0.55), ChS (0.48), and VEL (0.43) breeds. Conclusions: these findings suggest that Colombian creole breeds harbor a high genetic diversity which enriches its gene pool and warrants future conservation efforts to protect its integrity.

Colombia es uno de los países más diversos en recursos genéticos criollos. Posee ochos razas de ganado criollo (GCC) y dos razas de criollo mejorado o razas colombianas. La creciente demanda de alimentos ha generado una forzosa selección de individuos altamente productivos e introducción de razas foráneas (Holstein y Brahman) poco adaptadas a condiciones tropicales, lo que ha puesto en riesgo el tamaño efectivo del ganado criollo, considerado patrimonio nacional. Objetivo: estimar la frecuencia alélica del gen (CNS3) de la Kappa-Caseína en el (GCC). Métodos: se usaron 354 muestras de sangre de ocho razas bovinas criollas (30 individuos por raza): Blanco Orejinegro (BON), Caqueteño (CQT), Casanareño (CAS), Costeño con Cuernos (CCC), Chino Santandereano (ChS), Hartón del Valle (HV), Romosinuano (ROMO) y Sanmartinero (SM), dos colombianas Lucerna (LUC) y Velásquez (VEL) y dos controles Brahman y Holstein. Con el fin de estimar la frecuencia de los alelos k-caseína (k-CN) se amplificó un fragmento de 453 pb para k-CN (cromosoma 6). Los alelos se identificaron mediante la técnica PCR-SSCP. Resultados: se encontró mayor frecuencia para las variantes de k-CN A (0.39) y B (0.41), en comparación a I (0.038), G (0.095), A1 (0.025), E (0.006) y N (0.006). El alelo de interés k-CN B presentó alta frecuencia en las razas CCC (0.81), ROMO (0.66), CQT (0.55), ChS (0.48), y VEL (0.43). Conclusiones: la alta frecuencia del alelo de interés del gen k-CN ratifica al GCC como alternativa viable en esquemas sostenibles de producción de leche de mejor calidad y corrobora la necesidad de evaluación y caracterización de recursos zoogenético, como primer paso para su conservación.

A Colômbia é um dos países mais diversificado em recursos genéticos crioulos, tem oito bovinos da raça nativa e duas raças melhoradas ou raças crioulo colombiano (GCC). A alta demanda por alimentos tem levado a uma seleção forçada das pessoas altamente produtivas e/ou introdução de raças estrangeiras mal adaptados às condições tropicais, que têm prejudicado o tamanho efetivo de animais considerados património crioulo. Objetivo: estimar a frequência do alelo do gene Kappa-Caseína (CNS3) na (GCC). Métodos: foram utilizados 354 amostras de sangue de oito raças nativas (30 indivíduos por raça): Blanco Orejinegro (BON), Caqueteño (CQT), Casanareño (CAS), Costeño con Cuernos (CCC), Chino Santandereano (ChS), Hartón del Valle (HV), Romosinuano (ROM) e Sanmartinero (SM), dois Colombianas Lucerna (LUC) e Velásquez (VEL) e dois controles (Brahman and Holstein). Para estimar a freqüência de alelos de κ-caseína (CSN3), amplificaram um fragmento de 453 pb para CSN3. Os alelos foram identificados por PCR-SSCP. Resultados: encontramos uma maior freqüência de variantes do CSN3 A (0.39) e B (0.41), comparado com I (0.038), G (0.095), A1 (0.025), E (0.006) e N (0.006). O alelo de interesse CSN3 B apresentou alta freqüência em raças CCC (0.81), ROMO (0.66), CQT (0.55), CHS (0.48) e VEL (0.43). Conclusões: estes resultados sugerem que o CCG é um recurso genético, que abriga uma grande diversidade genética e apoia a necessidade de avaliação e caracterização dos recursos genéticos animais como um primeiro passo para a conservação.

Morphological and molecular description of Blastocrithidia cyrtomeni sp. nov. (Kinetoplastea: Trypanosomatidae) associated with Cyrtomenus bergi Froeschner (Hemiptera: Cydnidae) from Colombia

A new trypanosomatid species, Blastocrithidia cyrtomeni, is herein described using morphological and molecular data. It was found parasitising the alimentary tract of the insect host Cyrtomenus bergi, a polyphagous pest. The morphology of B. cyrtomeni was investigated using light and transmission microscopy and molecular phylogeny was inferred from the sequences of spliced leader RNA (SL rRNA) - 5S rRNA gene repeats and the 18S small subunit (SSU) rRNA gene. Epimastigotes of variable size with straphanger cysts adhering to the middle of the flagellum were observed in the intestinal tract, hemolymph and Malpighian tubules. Kinetoplasts were always observed anterior to the nucleus. The ultrastructure of longitudinal sections of epimastigotes showed the flagellum arising laterally from a relatively shallow flagellar pocket near the kinetoplast. SL RNA and 5S rRNA gene repeats were positive in all cases, producing a 0.8-kb band. The amplicons were 797-803 bp long with > 98.5 percent identity, indicating that they originated from the same organism. According to the sequence analysis of the SL-5S rRNA gene repeats and the 18S SSU rRNA gene, B. cyrtomeni is different from all other known species or isolates of Trypanosomatidae. Both analyses indicate that among known species, it is most closely related to Blastocrithidia triatomae.

Uso del láser terapéutico en el control del dolor en ortodoncia / Use of laser therapy in pain control in orthodontics

Se realizó una revisión de los últimos años de la literatura para analizar la información existente respecto al uso de láser terapéutico en el control del dolor durante el tratamiento de ortodoncia. Se encontró que el láser terapéutico puede ser efectivo como coayudante en el control del dolor sin embargo las diferencias no son significativas.

There is realized a review of last years of the literature to analyze the existing information with regard to the use of therapeutic laser in the control of the pain during the treatment of orthodontics.

Criptococosis en un paciente inmunocompetente. Informe de un caso / Cryptococcosis in an immunocompetent female patient. One case report

Se realizó la presentación de un caso con criptococosis con localización en el sistema nervioso central en un paciente inmunocompetente, atendida en el Hospital General de Medellín. La paciente presentó un cuadro de meningoencefalitis aguda. Se demostró la causa micótica del proceso mediante estudio microbiológico del líquido cefalorraquídeo. No se comprobaron otras localizaciones del hongo en el paciente...

Tiflitis isquémica gangrenosa simulando apendicitis aguda / Ischemic gangrenous tiphlitis simulating acute appendicitis

Se presenta un caso de tiflitis isquémica gangrenosa, en un paciente con enfermedad vascular visceral ATE, cuyas manifestaciones clínicas y de laboratorio fueron similares a las de una apendicitis aguda y que requirió de hemicolectomía derecha